Получение длинных ПЦР фрагментов

Acculong полимераза

Наименование	Кат.№	Буфер в комплекте	Фасовка	Цена, (руб.)
Acculong полимераза, 5 ед./мкл	A0102	1 мл с Mg²⁺	500 ед.	2 000
Acculong полимераза, 5 ед./мкл	A0103	5 мл с Mg²⁺	5 000 ед.	16 000

Описание

Acculong полимераза является специально подобранной смесью термостабильных мутированных ферментов. Максимальная активность фермента проявляется при темп. 65–74°С. Фермент осуществляет синтез ДНК в направлении 5'→3' в присутствии ионов Mg²⁺ и при соответствующем значении рН, а также обладает 3'→5' экзонуклеазной активностью. Амплификаты, полученные с использованием Acculong полимеразы, не имеют на 3’-концах дополнительных нуклеотидов. В связи с этим, рекомендуется клонировать полученные ПЦР – фрагменты в векторы, порезанные рестриктазами, дающими «тупые» концы.
Так как, для этих целей, как правило, используют дефосфорилированные векторы (предварительно обработанные фосфатазой, удаляющей фосфаты на 5’-концах, для предотвращения лигирования вектора самого на себя), необходимо предварительно прокинировать праймеры, используемые для получения ПЦР-фрагментов, или добавить 5’-фосфаты на полученный в ПЦР реакции фрагмент.

Хранение

-20°C.

Транспортировка

Специальных условий не требуется.

Состав буфера

Буфер с Mg²⁺ (x10):
500 mM Tricine-HCl, pH 9.0 / 25°C, 80 mM (NH₄)₂SO₄, 23 mM MgCl₂, 1% Tween 20

Применение

Проведение ПЦР, в случаях, если необходимо получить фрагмены длиной до 20 к.б. и/или фрагменты с минимальным количеством замен, внесенных полимеразой при амплификации. Получение длинных ПЦР-фрагментов с минимальным количеством замен с целью их дальнейшей очистки и клонирования и/или секвенирования.

Особенности

Максимальная длина амплификата, которую можно получить с использованием Acculong полимеразы приблизительно 20 000 п.н.. Стандартная амплификация включает этап элонгации при 68°C и времени 2 мин. на 1 к.б. длины получаемого фрагмента.

pFusion полимераза

Наименование	Кат.№	Буфер в комплекте	Фасовка	Цена, (руб.)
pFusion полимераза, 2 ед./мкл	PF0101	1 мл с Mg²⁺	200 ед.	5 000
pFusion полимераза, 2 ед./мкл	PF0102	5 мл с Mg²⁺	2 000 ед.	40 000

Описание

pFusion полимераза представляет собой Pfu полимеразу с прикрепленным термостабильным доменом, увеличивающим процессивность и точность работы фермента. pFusion полимераза осуществляет синтез ДНК в направлении 5'→3' в присутствии ионов Mg²⁺ и при соответствующем значении рН, а также обладает 3'→5' экзонуклеазной активностью. Амплификаты, полученные с использованием pFusion полимеразы, не имеют на 3’-концах дополнительных нуклеотидов. В связи с этим, рекомендуется клонировать полученные ПЦР – фрагменты в векторы, порезанные рестриктазами, дающими «тупые» концы.
Так как, для этих целей, как правило, используют дефосфорилированные векторы (предварительно обработанные фосфатазой, удаляющей фосфаты на 5’-концах, для предотвращения лигирования вектора самого на себя), необходимо предварительно прокинировать праймеры, используемые для получения ПЦР-фрагментов, или добавить 5’-фосфаты на полученный в ПЦР реакции фрагмент.

Хранение

-20°C.

Транспортировка

Специальных условий не требуется.

Состав буфера

Буфер с Mg²⁺ (x10):
500 mM Тricine -HCl, pH9.0 / 25°C, 80 mM (NH₄)₂SO₄, 23 mM MgCl₂, 1% Tween 20

Применение

Особенности

Максимальная длина амплификата, которую можно получить с использованием pFusion полимеразы приблизительно 20 000 п.н.. Стандартная амплификация включает этап элонгации при 72°C и времени 30 сек. на 1 к.б. длины получаемого фрагмента. Высокая точность работы - >50X по сравнению с Taq полимеразой. Высокая скорость элонгации (примерно в 10 раз выше, чем Pfu полимераза). Не требует оптимизации концентрации Mg²⁺. Высокий выход продукта.