TaqWT полимераза

Описание

TaqWT полимераза является термостабильным ферментом массой приблизительно 94кДа. Источник происхождения этого фермента Thermus aquaticus. Максимальная активность фермента проявляется при темп. 70–74°С, время полужизни при 94°С составляет прибл. 45 мин. Фермент осуществляет синтез ДНК в направлении 5'→3' в присутствии ионов Mg²⁺ и при соответствующем значении рН, а также обладает 5'→3' экзонуклеазной активностью (эта активность проявляется только при работе фермента на двухцепочечной ДНК). Наличие 5'→3' экзонуклеазной активности делает фермент пригодным для использования его в RealTime PCR. Амплификаты, полученные с использованием TaqWT полимеразы, могут иметь на 3’-концах дополнительный нуклеотид A. В связи с этим, рекомендуют клонировать полученные ПЦР – фрагменты в специальные векторы (например, pGEM-T или pGEM-T easy). При необходимости получить амплификаты без дополнительного нуклеотида А на 5’-концах рекомендуется использовать PfuTurbo или Acculong полимеразы.

Хранение

-20°C.

Транспортировка

Специальных условий не требуется.

Состав буфера

Буфер с Mg²⁺ (x10):
750 mM Трис-HCl, pH 8.8 / 25°C, 200 mM (NH₄)₂SO₄, 25 mM MgCl₂

Применение

PCR, RealTime PCR,
мечение ДНК различными меченными нуклеотидами
(радиоактивными и нерадиоактивными)

Особенности

TaqWT полимераза при работе вносит большое количество замен, поэтому не рекомендуется её использование, если предполагается дальнейшее клонирование и использование полученных последовательностей, например, в векторах экспрессии белков. Максимальная длина амплификата, которую можно получить с использованием TaqWT полимеразы приблизительно 5'000 п.н.. Стандартная амплификация включает этап элонгации при 72°C и времени 1 мин. на 1 к.б. длины получаемого фрагмента.

Использование

Рутинные анализы ПЦР и ПЦР в реальном времени, получение ПЦР-фрагментов с целью их дальнейшей очистки и секвенирования.

TaqD полимераза

Описание

TaqD полимераза является термостабильным ферментом массой приблизительно 94кДа. Источник происхождения этого фермента Thermus aquaticus. Максимальная активность фермента проявляется при темп. 70–74°С, время полужизни при 94°С составляет прибл. 45 мин. Фермент осуществляет синтез ДНК в направлении 5'→3' в присутствии ионов Mg²⁺ и при соответствующем значении рН, а также обладает 5'→3' экзонуклеазной активностью (эта активность проявляется только при работе фермента на двухцепочечной ДНК). Наличие 5'→3' экзонуклеазной активности делает фермент пригодным для использования его в RealTime PCR. Амплификаты, полученные с использованием Taq полимеразы, могут иметь на 3’-концах дополнительный нуклеотид A. В связи с этим, рекомендуют клонировать полученные ПЦР – фрагменты в специальные векторы (например, pGEM-T или pGEM-T easy). При необходимости получить амплификаты без дополнительного нуклеотида А на 5’-концах рекомендуется использовать Pfu или acculong полимеразы.

Хранение

-20°C.

Транспортировка

Специальных условий не требуется.

Состав буфера

Буфер с Mg²⁺ (x10):
750 mM Трис-HCl, pH 8.8 / 25°C, 200 mM (NH₄)₂SO₄, 25 mM MgCl₂

Применение

PCR, RealTime PCR,
мечение ДНК различными меченными нуклеотидами
(радиоактивными и нерадиоактивными)

Особенности

TaqD полимераза представляет собой вариант фермента, содержащий мутации, уменьшающие элонгацию праймеров при ложных посадках на матрицу (при наличии в них замен относительно последовательности посадки), что приводит к уменьшению уровня неспецифической амплификации и более чистому специфическому продукту реакции. Дополнительная замена в активном центре фермента позволяет эффективно использовать дидезоксинуклеотидтрифосфаты в качестве субстрата (обычто подобная замена вносится в ферменты, используемые при секвенировании), благодаря чему фермент может быть использован в MALDI-TOF.
TaqD полимераза – это вариант мутантной полимеразы Taq, имеющий дополнительную мутацию, значительно снижающую чувствительность фермента к загрязнениям, ингибирующим проведение ПЦР.

Использование

Рутинные анализы ПЦР и ПЦР в реальном времени, особенно в случаях загрязнённых проб.

TaqMut полимераза

Описание

TaqMut полимераза является термостабильным ферментом массой приблизительно 94кДа. Источник происхождения этого фермента Thermus aquaticus. Максимальная активность фермента проявляется при темп. 70–74°С, время полужизни при 94°С составляет прибл. 45 мин. Фермент осуществляет синтез ДНК в направлении 5'→3' в присутствии ионов Mg²⁺ и при соответствующем значении рН, а также обладает 5'→3' экзонуклеазной активностью (эта активность проявляется только при работе фермента на двухцепочечной ДНК). Наличие 5'→3' экзонуклеазной активности делает фермент пригодным для использования его в RealTime PCR. Амплификаты, полученные с использованием TaqMut полимеразы, могут иметь на 3’-концах дополнительный нуклеотид A. В связи с этим, рекомендуют клонировать полученные ПЦР – фрагменты в специальные векторы (например pGEM-T или pGEM-T easy). При необходимости получить амплификаты без дополнительного нуклеотида А на 5’-концах рекомендуется использовать Pfu или Acculong полимеразы.

Хранение

-20°C.

Транспортировка

Специальных условий не требуется.

Состав буфера

Буфер с Mg²⁺ (x10):
750 mM Трис-HCl, pH 8.8 / 25°C, 200 mM (NH₄)₂SO₄, 25 mM MgCl₂

Особенности

Данный фермент является высокоочищенным и способен выдерживать хранение при комнатной температуре без потери активности более двух месяцев.
TaqMut полимераза при работе вносит большое количество замен, поэтому не рекомендуется её использование, если предполагается дальнейшее клонирование и использование полученных последовательностей, например, в векторах экспрессии белков. Максимальная длина амплификата, которую можно получить с использованием TaqMut полимеразы приблизительно 5 000 п.н.. Стандартная амплификация включает этап элонгации при 72°C и времени 1 мин. на 1 к.б. длины получаемого фрагмента.
Данный фермент отличается от полимеразы дикого типа двумя особенностями: получение более чистых ПЦР фрагментов, за счет эмуляции «горячего старта» и низким уровнем дискриминации ddNTPs, что позволяет его использовать в методах с терминацией цепи, таких как MALDI-TOF.

Использование

ПЦР анализы, особенно, если при использовании Taq полимеразы получение ПЦР-фрагментов осложняется большим количеством неспецифических фрагментов ДНК.

TaqLR полимераза

Описание

TaqLR полимераза является термостабильным ферментом массой приблизительно 94кДа. Максимальная активность фермента проявляется при темп. 70–74°С, время полужизни при 94°С составляет прибл. 45 мин. Фермент осуществляет синтез ДНК в направлении 5'→3' в присутствии ионов Mg²⁺ и при соответствующем значении рН, а также обладает 5'→3' экзонуклеазной активностью (эта активность проявляется только при работе фермента на двухцепочечной ДНК). Наличие 5'→3' экзонуклеазной активности делает фермент пригодным для использования его в RealTime PCR. Амплификаты, полученные с использованием TaqLR полимеразы, могут иметь на 3’-концах дополнительный нуклеотид A. В связи с этим, рекомендуют клонировать полученные ПЦР – фрагменты в специальные векторы (например pGEM-T или pGEM-T easy).

Хранение

-20°C.

Транспортировка

Специальных условий не требуется.

Состав буфера

Буфер с Mg²⁺ (x10):
750 mM Трис-HCl, pH 8.8 / 25°C, 200 mM (NH₄)₂SO₄, 25 mM MgCl₂

Применение

Проведение ПЦР, RealTime PCR, фрагментный анализ, мечение ДНК различными меченными нуклеотидами (радиоактивными и нерадиоактивными).

Особенности

TaqLR полимераза – это мутантный вариант Taq полимеразы, отличающийся от дикого типа следующими параметрами: увеличенная процессивность, увеличенныа скорость работы и возможность получить ПЦР фрагменты большей длины. Кроме того, отмечено понижение амплитуды ложных пиков (статеров) при использовании ПЦР продуктов для фрагментного анализа. Максимальная длина амплификата, которую можно получить с использованием Taq полимеразы приблизительно 10'000 п.н.. Стандартная амплификация включает этап элонгации при 72°C и времени 30 сек. на 1 к.б. длины получаемого фрагмента.

Использование

Рутинные анализы ПЦР и ПЦР в реальном времени, получение ПЦР-фрагментов с целью их дальнейшей очистки и секвенирования. Фрагментный анализ.

Pfu TURBO полимераза

Описание

Pfu TURBO полимераза является специально подобранной смесью термостабильных мутированных ферментов и не содержит Taq полимеразу. Максимальная активность фермента проявляется при темп. 65–74°С. Фермент осуществляет синтез ДНК в направлении 5'→3' в присутствии ионов Mg²⁺ и при соответствующем значении рН, а также обладает 3'→5' экзонуклеазной активностью. Амплификаты, полученные с использованием Pfu TURBO полимеразы, не имеют на 3’-концах дополнительных нуклеотидов. В связи с этим, рекомендуется клонировать полученные ПЦР – фрагменты в векторы, порезанные рестриктазами, дающими «тупые» концы.
Так как для этих целей, как правило, используют дефосфорилированные векторы (предварительно обработанные фосфатазой, удаляющей фосфаты на 5’-концах, для предотвращения лигирования вектора самого на себя), необходимо предварительно прокинировать праймеры, используемые для получения ПЦР-фрагментов, или добавить 5’-фосфаты на полученный в ПЦР реакции фрагмент.
Количество ошибок, вносимых при амплификации соответствует параметрам Pfu полимеразы, однако, Pfu TURBO не так чувствительна к концентрации ионов Mg²⁺ и другим параметрам буфера. Кроме того, максимальная длина получаемого ПЦР-фрагмента значительно больше, чем при использовании Pfu полимеразы.

Хранение

-20°C.

Транспортировка

Специальных условий не требуется.

Состав буфера

Буфер с Mg²⁺ (x10):
100 mM Трис-HCl, pH 8.85 / 20°C, 250 mM KCl, 50 mM (NH₄)₂SO₄, 20 mM MgSO₄, 1% Tween-20

Pfu TURBO работает и в буфере для Taq полимеразы.

Применение

Проведение ПЦР в случаях, если необходимо получить фрагмены с минимальным количеством замен, внесенных полимеразой при амплификации с целью их дальнейшей очистки и клонирования. Проведение сайт-направленного мутагенеза методами с использованием ПЦР.

Особенности

Низкий уровень вносимых замен при амплификации. Максимальная длина амплификата, которую можно получить с использованием Pfu TURBO полимеразы приблизительно 10'000 п.н.. Стандартная амплификация включает этап элонгации при 72°C и времени 2 мин. на 1 к.б. длины получаемого фрагмента.

Bst полимераза LF

Описание

Bst полимераза, Large fragment – это полимеразный домен Bst полимеразы. Источник происхождения этого фермента - Bacillus stearothermophilus. Максимальная активность фермента проявляется при темп. 45–55°С. Инактивация фермента при 80°С происходит, приблизительно, за 20 минут. Фермент осуществляет синтез ДНК в направлении 5'→3' в присутствии ионов Mg²⁺ и при соответствующем значении рН. Bst полимераза, Large fragment не обладает 5'→3' экзонуклеазной активностью.

Хранение

-20°C.

Транспортировка

Специальных условий не требуется.

Состав буфера

Буфер с Mg²⁺ (x10):
200 mM Трис-HCl, pH 8.8 / 25°C, 500 mM KCl, 100 mM (NH₄)₂SO₄, 20 mM MgSO₄, 1% Tween-20

Применение

Проведение изотермального ПЦР, секвенирование по Сэнгеру, мечение ДНК различными меченными нуклеотидами (радиоактивными и нерадиоактивными).