Наборы для ОТ-ПЦР
Набор для ОТ-ПЦР в одной пробирке
| Наименование | Кат.№ | 2x Master Mix |
Фасовка | Цена, (руб.) |
|---|---|---|---|---|
| Набор для ОТ-ПЦР в одной пробирке | RT101 | 1 мл | 100 реакций | 8 000 |
| Набор для ОТ-ПЦР в одной пробирке | RT102 | 1 мл | 1 000 реакций | 45 000 |
Протокол для ОТ-ПЦР в одной пробирке
- Разморозьте 2x RT-PCR Master Mix (если хранится на –20°C), матрицу РНК, праймеры и меченный флюорофором зонд, воду. Перемешайте растворы и поместите в лед.
- Приготовьте реакционную смесь согласно Таблице 1.
- Перемешайте реакционную смесь и разнесите по ПЦР пробиркам, ПЦР капиллярам, или лункам ПЦР плашки.
| Компонент | Объем | Конечная концентрация |
|---|---|---|
| 2x RT-PCR Master Mix | 10 μl | 1x |
| Праймер A | 0.4 μM | |
| Праймер B | 0.4 μM | |
| Зонд | 0.1–0.2 μM | |
| RT EnzymeMix | 1 μl | - |
| Вода | До 20 μl | |
| Матрица РНК | 1pg–500 ng / реакция | |
| Общий объем | 20 μl |
- Добавьте матрицу РНК в ПЦР пробирки, ПЦР капилляры, или лунки ПЦР плашки.
- Установите программу в амплификатор согласно Таблице 2.
| Шаг | Время | Температура |
|---|---|---|
| Обратная транскрипция | 10 мин. | 50°C |
| Первичная активация ПЦР | 5 мин. | 95°C |
| 2-шаговая циклевка: Денатурация | 15 сек. | 94°C |
| Объединенный отжиг/элонгация | 60 сек. | 60°C |
| Количество циклов | 30–45 |
Условия денатурации и отжига/элонгации могут быть изменены в соответствии с характеристиками фрагмента и праймеров.
- Поставьте ПЦР пробирки, ПЦР капилляры, или ПЦР плашку в аппарат, и запустите программу циклевки.
Набор для ОТ-pFusion
| Наименование | Кат.№ | 2x Master Mix |
Фасовка | Цена, (руб.) |
|---|---|---|---|---|
| Набор для ОТ-pFusion | RpF1 | 1 мл | 100 реакций | 8 000 |
Протокол для ОТ‑pFusion
- Разморозьте 2x RT-pFusion Master Mix (если хранится на –20°C), матрицу РНК, праймеры, воду. Перемешайте растворы и поместите в лед.
- Приготовьте реакционную смесь согласно Таблице 1.
- Перемешайте реакционную смесь и разнесите по ПЦР пробиркам, ПЦР капиллярам, или лункам ПЦР плашки.
Возможности набора были протестированы на матрице РНК COVID-19.
| Компонент | Объем | Конечная концентрация |
|---|---|---|
| 2x RT-pFusion Master Mix | 10 μl | 1x |
| Праймер A | 1 μl 10 mM | 0.5 μM |
| Праймер B | 1 μl 10 mM | 0.5 μM |
| RT-pFusion EnzymeMix | 1 μl | - |
| Вода | До 20 μl | |
| Матрица РНК | 1pg–500 ng / реакция | |
| Общий объем | 20 μl |
- Добавьте матрицу РНК в ПЦР пробирки, ПЦР капилляры, или лунки ПЦР плашки.
- Установите программу в амплификатор согласно Таблице 2.
| Шаг | Время | Температура |
|---|---|---|
| Обратная транскрипция | 40 мин. | 42°C |
| Первичная активация ПЦР | 5 мин. | 95°C |
| 3-шаговая циклевка: Денатурация | 15 сек. | 98°C |
| Отжиг | 15 сек. | Зависит от праймеров |
| Элонгация | 30 сек./кб | 72°C |
| Количество циклов | 30–35 |
Условия денатурации и отжига/элонгации могут быть изменены в соответствии с характеристиками фрагмента и праймеров.
- Поставьте ПЦР пробирки, ПЦР капилляры, или ПЦР плашку в аппарат, и запустите программу циклевки.